mRNA疫苗的特點(diǎn)

?   mRNA不進(jìn)入細(xì)胞核，不會(huì)整合到人基因組上，安全性較高；

?   可激活體液免疫和細(xì)胞免疫雙重免疫系統(tǒng)，有效性更強(qiáng)，保護(hù)率更高；

?   研發(fā)周期短，尤其是在應(yīng)對病毒變異時(shí)，只需對S蛋白序列的堿基進(jìn)行突變，就能夠快速開發(fā)新型候選疫苗；

?   不需要細(xì)胞培養(yǎng)等過程，生產(chǎn)效率更高。

mRNA疫苗的開發(fā)包括mRNA體外合成、載體遞送等過程。其中，mRNA體外合成所需的原料酶對于 mRNA疫苗的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)至關(guān)重要。多寧生物提供全系列的GMP&非GMP原料酶，助力mRNA疫苗的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

線性模板制備

工業(yè)生產(chǎn)中，mRNA體外轉(zhuǎn)錄的模板通常是質(zhì)粒，在體外轉(zhuǎn)錄前需要對質(zhì)粒進(jìn)行線性化處理，因?yàn)檗D(zhuǎn)錄反應(yīng)會(huì)延續(xù)至DNA模板的末端，環(huán)狀質(zhì)粒模板會(huì)轉(zhuǎn)錄生成大小不同的mRNA轉(zhuǎn)錄本，線性化可以確保獲得確定長度及序列的mRNA轉(zhuǎn)錄本。

相關(guān)產(chǎn)品

Bsal

線性化模板可通過限制性內(nèi)切酶酶切質(zhì)粒獲得，需確保酶切產(chǎn)物為平末端或5’端突出結(jié)構(gòu)。需使用IIS型限制性內(nèi)切酶，IIS型限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)在識(shí)別位點(diǎn)以外，酶切完5’端突出。BsaI是一種IIS型限制性內(nèi)切酶，它的識(shí)別位點(diǎn)為6個(gè)堿基組成，具有高度特異性而極不容易出現(xiàn)‘類’酶切位點(diǎn)，能夠有效避免出現(xiàn)非特異性的酶切。

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mRNA體外轉(zhuǎn)錄

體外轉(zhuǎn)錄（IVT）是以線性化質(zhì)粒為模板，在RNA轉(zhuǎn)錄酶、NTP等條件下，模仿體內(nèi)轉(zhuǎn)錄過程生成mRNA的技術(shù)。質(zhì)粒模板通常使用的啟動(dòng)子為T7啟動(dòng)子，其轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度較高，是目前原核表達(dá)應(yīng)用最廣泛的啟動(dòng)子。T7 RNA Polymerase（T7 RNA聚合酶）對T7啟動(dòng)子具有高度特異性，且其活性較高，在Inorganic Pyrophosphatase、Murine RNase Inhibitor、DNaseI的輔助下，合成高產(chǎn)量的mRNA。

相關(guān)產(chǎn)品

T7 RNA聚合酶

本品為重組E.coli 表達(dá)的T7噬菌體DNA編碼的蛋白，是一種高度特異性識(shí)別T7啟動(dòng)子序列（5’-TAATACGACT CACTATAGGG-3’）的 DNA依賴的5'→3' RNA聚合酶。以含有T7啟動(dòng)子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板，NTP為底物，合成與啟動(dòng)子下游的單鏈DNA或雙鏈DNA模板鏈互補(bǔ)的RNA。

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無機(jī)焦磷酸酶

本品是重組大腸桿菌表達(dá)酵母來源的無機(jī)焦磷酸酶（PPase），是一種催化一分子焦磷酸鹽轉(zhuǎn)化為兩分子磷酸鹽離子的酶，使無機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽，這是一個(gè)高放能的反應(yīng)，因此，此反應(yīng)可偶聯(lián)到一些熱力學(xué)上不利的轉(zhuǎn)化，以便驅(qū)動(dòng)這些轉(zhuǎn)化進(jìn)行完全。在分子生物學(xué)中可用于體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高mRNA產(chǎn)量。

無機(jī)焦磷酸酶作用原理

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鼠源RNase抑制劑

本品是以可溶形式在大腸桿菌中表達(dá)純化的鼠源RNase抑制劑，能抑制 RNase A, RNase B 或 RNase C 這三種酶的活性，主要參與mRNA體外轉(zhuǎn)錄中對mRNA的保護(hù)。

DNaseI(脫氧核糖核酸酶I)

DNase I是一種可消化單鏈或雙鏈DNA的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶，它識(shí)別并切割磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5'-磷酸基團(tuán)和 3'-OH的單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸。

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mRNA加帽系統(tǒng)

體外轉(zhuǎn)錄的mRNA的5’端含有三磷酸基團(tuán)，具有很強(qiáng)的免疫原性，若將其遞送至體內(nèi)，會(huì)激活固有免疫應(yīng)答，RIG-1會(huì)識(shí)別三磷酸基團(tuán)，導(dǎo)致其無法在體內(nèi)正確翻譯出抗原蛋白。因此，在工業(yè)生產(chǎn)中需對 mRNA進(jìn)行加帽修飾以逃避固有免疫系統(tǒng)。使用酶法進(jìn)行加帽，首先應(yīng)使用牛痘加帽酶使mRNA的5'端帶上帽0帽子，再進(jìn)一步使用mRNA 帽 2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶 (GMP 級)，使帽0轉(zhuǎn)變?yōu)槊?。帽1的免疫原性比帽0低，不易被RNA 傳感器識(shí)別。

mRNA酶法加帽

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